新型毒品丁丙诺啡检测分析方法研究进展

新型毒品丁丙诺啡检测分析方法研究进展

丁丙诺啡（Buprenorphine，Bup）最早由20世纪60年代英国药物学家合成，属于生物碱蒂巴因的衍生物。丁丙诺啡是阿片受体激动一拮抗剂，主要用于镇痛，1978年起开始作为阿片类依赖治疗的药物。我国在1988年批准其作为镇痛药用于临床。与传统的吗啡、美沙酮等药物相比，丁丙诺啡具有很大的优势，因此被广泛用于临床镇痛和阿片类毒品依赖的脱瘾药。但丁丙诺啡仍有一定的依赖潜力，长期使用可产生耐受性和成瘾，使其由戒毒毒品转化为滥用毒品。

近年来，使用丁丙诺啡替代吸食（注射）海洛因的吸毒人员不断增多。据报导‘21我国某省会城市约70%的吸毒人员使用过盐酸丁丙诺啡。因而丁丙诺啡已成为近年来司法鉴定中比较常见的检测药物之一。国内外关于丁丙诺啡的提取和分析检测研究已经取得了一定的进展，对指导临床安全用药以及法医毒物分析的研究具有重要的意义。

1理化性质

丁丙诺啡的分子式为C29 H4, N04，化学名称为N一环丙基甲基-7α[I一(S)一1-羟基-1，2，3三甲基]一6，14-桥乙烷-6，7，8，14-四氧东罂栗碱，其化学结构与吗啡相似（图1）。由于在第6和7位碳原子分别有甲氧基和异己醇基，这两个基团有增强阿片受体的激动作用，凶此丁丙诺啡有激动一拮抗的双重特性。丁丙诺啡的辛醇水溶液的分配系数是l217，这表明丁丙诺啡具有很高的亲脂性，易被机体吸收并快速分布。

2提取净化方法的研究

目前国内外研究主要集中在对血、尿、肝、头发等体液和组织中提取丁丙诺啡方法的研究。常见有液一液萃取、固相萃取、酶消化、衍生化等。

2.1液一液萃取法

刘冬娴等和贺江南等研究了血浆和肝组织中丁丙诺啡液液萃取方法。乙醇除蛋白，pH7条件下用三氯甲烷提取，BSTFA衍生化，GC/MS分析，血浆回收率可达85.8%，肝中回收率达82.51%。Giovanni等人用三氯甲烷：异丙醇(9：1)提取尿液、血清、唾液、头发等检材中的丁丙诺啡。检材先用p-葡萄糖苷酸酶水解，pH8条件下用三氯甲烷：异丙醇(9：1)提取，80℃下BSTFA衍生化10min，经GC/MS分析。Liu等用乙酸乙酯在提取血中丁丙诺啡和丁丙诺啡丙酸盐，回收率84%以上。Pirnay等用Toxitubes A（内装二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、庚醇、异丙醇混合液）提取大鼠血浆中的丁丙诺啡和氟硝安定，丁丙诺啡平均回收率为89%。George等‘91用氯仿：异丙醇(9：1)，在pH9条件下提取尿液中的丁丙诺啡，绝对回收率59%。Favretto等比较了氯丁烷／异丙醇( 9/1，v/v)和二氯甲烷／异丙醇／正庚烷( 25/10/65，v/v)萃取效率，发现两者的提取回收率较高，均在85%以上。

2.2固相萃取法

固相萃取( SPE)是70年代中期出现的技术，至今已发展成为多领域样品预处理的标准模式，是目前样品处理中较为简捷、高效、灵活的一种手段。贺江南等用401有机担体制作同相萃取柱，三氯甲烷做洗脱剂，BSTFA衍生化后检测，回收率可达86.35%。Mercolini等用C8柱提取体液中的丁丙诺啡，回收率达到96%以上。Liu等使用OasisHLB柱(20mm×2.Imm，3.5μm)，利用在线固相萃取技术提取检测尿液中的丁丙诺啡，回收率93.6%～102.2%。Yue等使用Oasis MCX 96孔柱（60mg，60 μm），5%的氨水甲醇溶液作为洗脱液，检测脑中丁丙诺啡含量在20ng／g、200ng/g、2000ng/g时回收率分别为51.30%、69.06%、63.36%；血浆在33 ng/mL、333ng/mL、3333ng/mL时回收率分别为74.64%、80, 15%、84.61%。Murphy等使用Strata-X．C柱(60mg/3 mL)，ImL血浆中加入50μL磷酸，震荡10s，过经2mL甲醇和2mL水预处理的固相柱，真空下用2mL 0.1%的磷酸冲洗，干燥3min，2mL5%的氨水甲醇溶液洗脱，方法在3.Ong/mL、15ng/mL、30ng/mL的相对回收率分别是116.9%、82.3%、82.3%.Favretto等用Bond Elut C18( 200mg/3mL)柱，血液和尿液先经B-葡萄糖苷酸酶65℃消化th，2mL尿液添加l00mg碳酸铵；血液用冰乙腈除蛋白。处理后的血、尿试样分别通过经3mL甲醇和3m10.01 mol/L的碳酸铵缓冲液预处理的固相柱，3mL碳酸铵缓冲液冲洗，真空干燥5min，1mL甲醇洗脱2次；。尿液回收率在80%以上，血液回收率较低在70%一80%。

2.3试样的水解

丁丙诺啡进人体内后经肝脏中CYP3 A4的N-脱烷基作用，产生的主要产物是诺丁丙诺啡，丁丙诺啡和诺丁丙诺啡与葡萄糖醛酸结合产生丁丙诺啡葡萄苷酸和诺丁丙诺啡葡萄糖苷酸。因此，水解使检材中丁丙诺啡和诺丁丙诺啡呈游离状态极为重要。主要有酸水解、碱水解、酶解等。Feng等人研究了丁丙诺啡葡萄糖酐酸的水解法，发现酶解效果最好，酸水解和碱水解的效果较差，不适合用来处理丁丙诺啡葡萄糖苷酸。Fox等用Patella vulgatep-葡萄糖苷酸酶处理尿液，与不经处理的尿液比较发现，丁丙诺啡和诺丁丙诺啡含量变化范围很大，丁丙诺啡含量从0一67%，平均为6.4%，诺丁丙诺啡含量从0~100%，平均为34 010。因此，经过酶解处理后可提高丁丙诺啡和诺丁丙诺啡的检出含量。

2.4衍生化

丁丙诺啡的分子量大，沸点较高，给GC-MS分析带来许多因难。因此，考虑用衍生化后技术改变性质再进行GC-MS分析。Wu等比较了丁丙诺啡的几种衍生化方法，包括甲基化、乙酰化、三氟乙酰化、五氟丙酰化、七氟丁酰化及三甲基硅烷基化。发现丁丙诺啡经过乙酸酐衍生化效果最好。刘冬娴等人使用BSTFA-TMCS衍生化试剂，微波炉560W衍生3 min条件下进行衍生化于涉毒案件中丁丙诺啡的检验，效果最佳。柴育芳等人研究了BSTFA的最佳衍生化条件，结论是：以吡啶为溶剂，油浴80C温度下反应30min，整个衍生化过程应在氮气保护下进行。

3检测方法

随着分析技术的发展，对丁丙诺啡的检测方法亦在不断更新，目前较多使用的是HPLC和HPLC-MS法。

3.1 TLC法

刘冬娴等利用三氯甲烷：苯：乙二胺(9：9：2，v/v/v)作为展开剂，254nm紫外光和碘化铋钾为显色剂对丁丙诺啡检测。结果显示，在254nm紫外光下发蓝紫色荧光，碘化铋钾试剂显色为淡黄色斑点，Rf值为0.54。这种方法在血浆、尿、水中的检出限分别为0.7 μg/mL、0.7μg／mL和0.6μg/mL。该法作现场物证筛选较好，方法简单易行。

3.2 GC法以及GC-MS法

刘冬娴等用HP-5（15m×0.53mm，0.25 μm）毛细管柱，NPD检测器，线性范围为0.2μg/mL一80 μg/mL，检出限10ng/mL，该方法灵敏度高，稳定性好，操作简单，可用于涉毒案件中丁丙诺啡的检验。George等建立了GC-MS法检测丁丙诺啡，使用HP-5 MS毛细管柱（30m×0.25mm，0.25 μm），选择离子扫描，以特征离子碎片m/z= 468（诺丁丙诺啡），m/z= 450（丁丙诺啡）测得检测限为1．Ong/mL。这种方法灵敏度高，可重复性好，适合用于丁丙诺啡的药理特征研究以及检测分析。Pimay等用氟硝安定做内标，选用30m×0.25mm色谱柱，内涂0.25μm苯基甲基聚硅氧烷，EI离子源，四极杆质量分析器，选择离子扫描。该方法检测血浆中丁丙诺啡的线性范围为0.125ng／μL一25ng/μL，诺丁丙诺啡为0.125ng/μL一12.5ng/μL，氟硝安定为0.125～5ng/μL。三种物质的最小定量限为0.125 ng／．LL，非常适合用于丁丙诺啡药动力学的研究。Ciovanni等检测尿液、血清、唾液、头发中丁丙诺啡，12m×0.2mm色谱柱，内涂0.33 μm聚甲基硅氧烷，El源，选择离子扫描，m/z =450，454。检测限1ng/mL。

3.4 HPLC法和HPLC-MS法

Liu等用液相色谱一荧光检测法检测动物血液中的丁丙诺啡，硅胶柱（250mm×4.6mm，5μm），线性范围2ng/mL—1500ng/mL．定量限为2．Ong/mL。Mostafavi等使用RP-HPLC分析丁丙诺啡／纳洛酮片剂中盐酸丁丙诺啡和盐酸纳洛酮的含量，Per-fectsil Target ODS3色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温35℃，210nm紫外检测，丁丙诺啡线性范围为0.22μg／mL~220μg／mL，纳洛酮0.1μg／mL一100μg／mL。刘冬娴用奋乃静做内标以HPLC-MS法检测，选用Thermo Hypersil—HyPURITY C18（150mm×2.Imm．5μm）色谱柱，电喷雾电离源( ESI)，选择离子检测(SIM)，m/z= 468（丁丙诺啡）、404（奋乃静）。方法的线性范围为0.2斗g／L~100.Oμg/L，检出限为0.lμg/L，丁丙诺啡和内标物得到了完全分离，检材中内源性杂质对分析几乎无干扰。Yue等用Symmetry Slueld RP C8色谱柱(4.6m×50mm，3.5μm)，丁丙诺啡-D4和诺丁丙诺啡-D3做内标HPLC-MS法分析，大气压离子溅射源，四极杆质量分析器，选择离子扫描。该方法在血浆中的线性范围为7ng/mL~ 8333ng/mL．最小定量限为7 ng/mL，在脑组织中的线性范围为5ng/g一5000ng/g，最小定量限是5ng/g。Liu等用丁丙诺啡-D4做内标，利用在线SPE_LC-ESI-MS/MS技术检测尿中的丁丙诺啡，线性范围0.5ng/mL—l00ng/mL，检测限为0.2ng/mL。Favretto等‘iOJ的研究中选用Luna CN（150mm×2.Imm，5μm）色谱柱，LCQ（Thermo Finnigan）离子阱质谱仪，ESI离子源，电压4.5kV。该方法显示了很高的灵敏度，在血液和尿液中的线性范围0.Ing／mL~10ng/mL，定量限为0.1 ng/mL，检测限0.05 ng/mL；在头发中线性范围10pg/mg一160pg/mg，定量限10pg/mg，检测限4pg/mg。

4结语

从本文给出的信息看，国外对丁丙诺啡的检测方法进行了大量研究，检测水平已经达到痕量。国内虽亦有不少研究，但高水平的检测方法研究以及在实际案件中的应用还需进一步探索。因而，建立丁丙诺啡的系统检验方法已经成为国内毒化工作者亟待解决的实际问题。